2.1. Identificaci\u00f3n morfol\u00f3gica y bioqu\u00edmica de los aislados<\/p>\n\n\n\n
Los aislados de E. coli del presente estudio fueron seleccionados del Banco Biol\u00f3gico de Materiales de la Universidad de la Ci\u00e9nega del Estado de Michoac\u00e1n de Ocampo, los cuales fueron obtenidos de vacas diagnosticadas con mastitis. Un total de 19 aislados fueron reactivados en el laboratorio de Anatom\u00eda y Patolog\u00eda de la Universidad de Guanajuato. 100 \u03bcL de cada muestra fue extendida homog\u00e9neamente sobre las superficies de agar MacConkey y agar Eosina y Azul de metileno en cajas Petri; posteriormente, las cajas se dejaron secar dentro de una campana de bioseguridad y se incubaron a una temperatura de 36 \u00b1 1\u00b0C. Las cajas se leyeron despu\u00e9s de 24-48 h, tal como est\u00e1 descrito en el Consejo Nacional de Mastitis (NMC, 1999), para identificar el crecimiento de colonias sugerentes a E. coli. Los aislados fueron identificados morfol\u00f3gica y bioqu\u00edmicamente, incluyendo las pruebas de indol, citrato, motilidad, producci\u00f3n de \u00e1cido sulfh\u00eddrico (H2S), producci\u00f3n de gas, fermentaci\u00f3n de carbohidratos (lactosa, glucosa y sacarosa), e hidr\u00f3lisis de urea (Sykes & Rankin, 2014). Todos los aislados se cultivaron en caldo Luria Bertani (LB) a 36 \u00b1 1\u00b0C, y resguardados a -20\u00b0C con 15% de glicerol.<\/p>\n\n\n\n
2.2. Determinaci\u00f3n de la eficacia l\u00edtica del fago de Escherichia coli<\/p>\n\n\n\n
El fago de E. coli fue aislado, purificado y provisto por la compa\u00f1\u00eda SEDEBIO\u00ae. Se determin\u00f3 la capacidad l\u00edtica del fago a trav\u00e9s de la prueba de la gota, con modificaciones (Poxleitner et al., 2018). 1 mL de cada soluci\u00f3n se extendi\u00f3 de manera homog\u00e9nea utilizando hisopos est\u00e9riles de algod\u00f3n sobre placas Petri con agar LB dividido en cuatro cuadrantes. Despu\u00e9s, una gota de 20 \u03bcL de la soluci\u00f3n de fagos, a una concentraci\u00f3n de 4.8X105, se coloc\u00f3 sobre tres de los cuadrantes de cada caja inoculada con E. coli, colocando en los cuadrantes n\u00famero 4 una gota de agar LB est\u00e9ril como control negativo. Las cajas se secaron y se incubaron a 36 \u00b1 1\u00b0C durante 18 a 24 h para su posterior lectura y observaci\u00f3n de la actividad l\u00edtica del fago, el cual fue determinado por la presencia o ausencia de zonas claras (calvas) en la superficie del agar. Los di\u00e1metros de las zonas de lisis fueron medidos y registrados en mm.<\/p>\n\n\n\n
- \n
- Resultados<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n
El bacteri\u00f3fago de Escherichia coli tuvo una efectividad del 100% de lisis sobre los 19 aislados de leche de vacas diagnosticadas con mastitis, con un di\u00e1metro de calvas promedio de 2.26 mm (Cuadro 1).<\/p>\n\n\n\n
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- Discusi\u00f3n<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n
Los pat\u00f3genos ambientales y contagiosos causantes de mastitis en las unidades de producci\u00f3n de leche de bovino, pero sobre todo E. coli, requieren estrategias alternativas que mitiguen la resistencia antimicrobiana que ha ido en aumento en los \u00faltimos a\u00f1os. Dentro de estas estrategias, los bacteri\u00f3fagos y la fagoterapia pueden considerarse una alternativa prometedora ya que, adem\u00e1s de igualar o mejorar los efectos terap\u00e9uticos de los antibi\u00f3ticos convencionales, contribuyen a la preservaci\u00f3n de la salud p\u00fablica y del medio ambiente (Carrillo-Huerta, 2024).<\/p>\n\n\n\n
Los resultados del presente estudio han resultado significativamente superiores en comparaci\u00f3n con lo descrito por otros autores, como el de Abdulhussein & Abdulsattar (2022), quienes aislaron dos bacteri\u00f3fagos de E. coli (AAA1 y AAA2) en Iraq, y registraron una eficacia l\u00edtica de solo un 12 y 3%, respectivamente. Mientras que Sahin et al. (2022), probaron tres fagos y obtuvieron porcentajes de lisis del 25, 64.5 y 79.2%, respectivamente, sobre sus aislados de E. coli. Otro fago de Escherichia coli fue aislado y probado por Xiao et al. (2023), el cual mostr\u00f3 eficacia l\u00edtica sobre 21 de sus 92 aislados (22.8%); resultados similares fueron encontrados por Elbahnasawy & El Sayed (2021), en donde se probaron otros tres fagos y se obtuvieron porcentajes de eficacia l\u00edtica de 39.1, 28.9 y 32.3% respectivamente, sobre aislados de E. coli, de los cuales, el 60% estuvieron clasificados como MRA. Dos fagos de E. coli fueron enfrentados a 24 aislados de E. coli en un estudio llevado a cabo por Fu et al. (2021), donde se registr\u00f3 una eficacia l\u00edtica del primer fago sobre la mitad de los aislados (7 de ellos MRA), y del segundo fago sobre 10 de los aislados (todos ellos MRA). Al compararse los patrones de resistencia a los antibi\u00f3ticos con la actividad l\u00edtica observada en los estudios antes mencionados, se demostr\u00f3 que no hubo asociaci\u00f3n entre ambas variables, situaci\u00f3n que se confirma con los resultados del presente estudio, al haberse obtenido un 100% de eficacia l\u00edtica sobre 19 aislados de E. coli multirresistentes.<\/p>\n\n\n\n
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- Conclusi\u00f3n<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n
De los 19 aislados de E. coli multirresistentes seleccionados para este estudio, presentaron un \u00edndice de multirresistencia a los antibi\u00f3ticos de 0.36 a 1.00, considerando que un valor igual o mayor a 0.2 es de importancia sanitaria. El bacteri\u00f3fago de Escherichia coli demostr\u00f3 un 100% de capacidad l\u00edtica en contra de los aislados obtenidos de leche de vacas infectadas con mastitis utilizados en el presente estudio, lo cual vuelve al fago un prospecto prometedor para ser utilizado como un agente terap\u00e9utico en contra no solo de la mastitis ambiental ocasionada por Escherichia coli, sino contra cualquier cuadro ocasionado por dicha bacteria en animales e, incluso, en seres humanos.<\/p>\n\n\n\n
- Conclusi\u00f3n<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n
- Discusi\u00f3n<\/li>\n<\/ol>\n\n\n\n